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looming模型--視覺誘發的小鼠本能防御性行為實驗方法總結

模型概述

采取合適的防御行為及時應對危險刺激的能力對個體的生存繁衍至關重要。對于小鼠來說,避開空中捕食者,如老鷹和貓頭鷹,是一種核心的生存功能,主要的感官方式是視覺。近年來,已經為嚙齒動物開發了一種有趣的行為范式——looming模型,該模型完全依靠視覺刺激來引發先天的恐懼反應,由YilmazMeister2013年開創。該范式使用一種黑暗的視覺刺激,這種刺激在頭頂不斷迫近,尺寸增加,模仿飛行捕食者的快速前進。實驗裝置中還設置一個簡陋的庇護所,從而為小鼠提供了尋求**的機會。在這些條件下,當暴露于不斷擴大的黑暗視覺刺激時,小鼠會采取兩種不同的先天防御策略之一:一種行為是快速逃跑:小鼠沖到一個不透明的巢穴下面尋找掩護。這種反應具有明顯的進化優勢,因為迫近的陰影可能代表了空中捕食者,并且隱藏在掩體下可以防止小鼠被吃掉。**種行為是凍結行為:小鼠停止移動并長時間完全靜止不動。乍一看,這可能不是一個好主意,但非移動的小鼠確實可以更好地融入環境,并且比移動目標更難被發現。執行特定防御行為的概率在很大程度上取決于實驗參數的各個方面。


儀器介紹

行為測試裝置是一個無頂的有機玻璃盒子,48 cm ×35 cm ×30 cm盒子的地板和三面墻壁*好覆蓋啞光噴涂涂層,以防止視覺刺激的反射。一個20 cm ×12 cm的不透明的三角棱柱形狀的庇護所位于裝置的一個角落。朝下固定在裝置頂部的LCD顯示屏顯示一個灰色屏幕(48 cm × 27 cm,平均亮度30-40 candela/m2)。視覺刺激是提前編程的,并顯示在LCD監視器上4個明亮的LED為視頻錄制提供紅外照明,紅外對于小鼠來說是看不見的任何可以可視化整個裝置的攝像機均可以用于行為記錄,以30幀每秒的速度記錄小鼠的運動



實驗動物

該模型發展不過十年,主要應用于小鼠。大鼠也有類似的行為,但是更為復雜。一般選取8-12周齡的C57BL6/J小鼠,將其分組飼養,并保持12小時光暗周期。而且研究表明,在白天和晚上以及雄性和雌性動物之間的逃跑頻率和逃跑潛伏期沒有顯著差異。因此在動物性別以及實驗時間的選擇上更靈活。但建議在白天進行實驗,因為動物通常看起來不那么焦慮。

注意事項:模型創建者還觀察到,飼養在不同動物設施中的不斷迫近的陰影有不同的行為模式。一組傾向于以逃跑來回應,而另一組則表現出逃和明顯的凍結行為混合的反應。因此,雖然兩者都表現出了快速而強烈的防御反應,但細節有所不同即使實驗是用從同一商業供應商獲得的同一品系的小鼠進行的。這強調了在世界各地不同的實驗室研究行為視覺生理學時,標準化飼養條件的重要性,這樣才有利于比較實驗室的行為結果

實驗程序


(一).創建視覺刺激

視覺刺激可以使用自定義Python腳本創建,并使用Windows Game Recorder(微軟公司)記錄下來,以便在行為測試中重播。不斷迫近的陰影刺激的代碼可在以下網址獲得:www.github.com/kpc-simone/shadow-graphics

不斷迫近的陰影刺激為一個黑色圓盤,該圓盤以三個不同的階段出現在淺色背景上:1.呈現直徑為2厘米的靜態圓盤32.圓盤在接下來的 2秒內擴大到直徑20 厘米3.*后,直徑為20厘米的圓盤再保持這個大小3秒。通過運行上述網站上報告為 example1.py 的腳本,可以重現10個這樣的刺激序列。(也有研究采用更快的刺激呈現速度:250 毫秒內從直徑1厘米迅速擴展到25.5厘米,并在這個尺寸上繼續保持500毫秒)

在黑色圓盤出現之前和之后,顯示器上呈現統一的灰色(RGB參考128128128)背景。

(二).為適應階段創建背景

在適應期間,動物放置在測試裝置中,沒有視覺刺激,只有LCD屏幕上的灰色背景作為**的光源。可以使用PowerPoint或通過暫停刺激的**幀來創建靜態背景。



2、將用來躲避視覺刺激的庇護所放置在裝置的一個角落,僅允許動物從一側進入(圖三)。



3、 LCD 屏幕朝下固定裝置上方3cm)以顯示視覺刺激(圖四) PC 或筆記本電腦連接到 LCD 屏幕。復制屏幕并使用Windows 媒體播放器全屏打開視頻。至關重要的是,當視頻暫停或完成時,測試屏幕不會改變測試區域的亮度



4、在測試房間內,燈光應關閉,動物**可用的光源是位于測試裝置頂部的屏幕提供的光源,充當虛擬天空(圖五)。



5、測試房間應保持安靜,研究者不應在動物視野范圍內(在黑暗的房間里距離2 m以上,圖六)。



6、攝像機應放置在實驗裝置上方的一個角落,以便捕獲整個裝置的圖像(圖七)。



適應測試房間和實驗裝置

1、在開始實驗設備的適應程序之前,先使動物適應測試房間3天。每天使用相同的方法將動物運送到測試室。動物每天應在房間內停留至少 30 分鐘。

2、使動物適應實驗設備。在適應開始前15分鐘將動物移至測試室。在這 15 分鐘,關閉房間的燈并打開顯示灰色背景的LCD屏幕。將動物放置在裝置中,讓它自由探索 20 分鐘。在這一時期,動物通常表現出探索性的姿勢,如后腿直立和嗅探。此過程應重復 3 天。不需要是連續適應3,但適應的*后**應該在測試開始前 24 小時發生。對設備的適應對于確保動物正確顯示防御行為很重要。



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